大麻植物组织培养
另一种克隆方法是植物组织培养,也称为微繁殖或体外繁殖,源自拉丁语,意思是“在玻璃中”。简单来说,组织培养本质上是无菌克隆。在无菌环境中以指数方式繁殖细胞和植物。
植物组织培养已经存在很长时间了。实验性植物组织培养最早始于 1898 年,但直到 20 世纪 50 年代才在商业兰花产业中得到广泛应用。当然,由于历史上的法律障碍,大麻组织培养领域的研究仍处于起步阶段。
植物组织培养用途
- 增长速度加快
- 配种
- 传播
- 基因年轻化
- 遗传(种质)保存
- 病毒消除
- 基因组学
- 基因工程
一些植物组织培养技术比其他技术更复杂,有些方法对于初学者来说可能一开始似乎难以承受或遥不可及。目前在 THC Design,我们主要仅使用最基本的非转基因植物组织培养技术作为克隆和消除病虫害的方法。
随着我们对大麻中发现的大麻素和萜烯的全谱有了更深入的了解,我们将能够“拨入”我们菌株的遗传学,以增强某些性状或增加精选大麻素或萜烯的效力。设计师,定制大麻。
植物组织培养过程:
设备和工作空间的消毒始终至关重要。
启动阶段(1 至 2 周)
病原体通常会在前两周内在培养基中生长或在幼苗中表达。通过观察植株的性状、在第三方商业病毒检测实验室测试植物组织或进行试纸条测试,我们可以确定病原体的消除是否成功。然后将成功清洁且健康的幼苗分开,添加到增殖培养基中,然后转移到更大的容器中。在此阶段,必须定期将幼苗分裂并转移到新鲜的营养培养基中。在遗传开始退化之前,我们通常会进行 5 代繁殖。
- 增长速度加快
- 配种
- 传播
- 基因年轻化
启动阶段(1 至 2 周)
程序
- 打开层流罩,并使其运行至少 30 分钟,然后再尝试该程序。如果您没有层流罩,请使用酒精灯/燃烧器并尽可能靠近火焰进行操作。
- 用 70% 乙醇对层流罩进行消毒。请勿直接喷射到引擎盖背面,因为这可能会损坏 HEPA 过滤器。
- 打开微珠灭菌器。预热到一定温度至少需要 20 分钟,但这可能取决于制造商。
- 将装在可高压灭菌袋中的一包纸、最终放置植物的容器、几升水和吐温 20 放入高压灭菌器中进行消毒。确保在液体/缓慢排气循环中运行液体(切勿将容器填充超过 50%),并在干燥循环中运行纸张。
按如下方式准备一批介质:
- 准备一个足够大的容器来容纳您想要制作的介质数量。
- 用可用的最纯净的水填充容器。蒸馏水、反渗透水或去离子水是理想的选择。如果您要制作 1 升,请添加总体积的约 90%,即 900 毫升。
- 添加植物大麻营养素直至达到 1.5 EC
- 添加 30 克/升糖。
- 用 1.0 M HCl 或 NaOH 将溶液 pH 调节至 5.7
- 添加 6 g/L 琼脂(请注意,除非在热板上加热溶液,否则琼脂不会均匀混合。如果您将培养基分装到多个瓶子中,最好向各个瓶子中添加适量的琼脂 - 例如,对于装有 500mL 培养基的 1L 瓶子,请向瓶子中添加 3.5 g 琼脂)。
- 将您的介质倒入可高压灭菌的瓶子中。切勿完全装满瓶子,因为在高压灭菌过程中瓶子会溢出。半满是一个很好的目标。
- 液体循环高压灭菌器灭菌时间为 15 分钟。
- 循环完成后,取出介质(注意高压灭菌器很危险 - 请参阅安全指南)。
- 将培养基倒入已消毒的容器中,每个容器约 50 毫升或 1-2 英寸深。
准备 0.5% 漂白剂 (15% v/v) 和 0.1% 无菌 Tween 20 的溶液(每 1L 1g 或 1mL)。
- 大多数漂白剂含量为 2.75%,因此每 1L 添加 181.81 mL。
在容器中装满少量水,切下大麻植物材料,然后将其放入水中。您可以将整个树枝剪掉,然后将其分成 2-4 英寸的部分,每个部分包含一个节点。新的植物材料将从节点中生长出来。确保植物材料健康。
- 如果在引发开始前将插条存放超过 1 小时,请将插条放入装有冰的冷却器中。可以用湿纸巾包裹纸巾上任何暴露的切口。一般来说,尽量尽快将切口放入水中。
- 获取可密封的灭菌器皿或容器。将漂白剂/吐温溶液装满约 80%。将大麻段添加到容器中并密封。
轻轻摇动/旋转 20 分钟。20 分钟结束时用力摇晃 20 秒。
- 摇床可用于摇动。
将外植体转移到另一个装有约 80% 灭菌水的灭菌容器中,轻轻摇动/旋转 5 分钟
- 再重复此步骤两次。
使用无菌镊子,将外植体转移到一张无菌纸上以吸收多余的水,然后转移到您准备的培养基容器上,每个容器一个外植体。
- 应将植物直立放入培养基中,以使其受到支撑,但不要完全放入容器底部。
- 将容器放在 25 +/- 2°C、18 小时光照条件下的生长架上至少 3 周。
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